Астрономия и микроскопия

1/ акридиновый оранжевый мне добыть уже почти удалось, завтра-послезавтра поеду забирать, но отнюдь не по предложенным ссылкам, Он там давно и безнадежно отсутствует. Кому интересно - я заказал вот здесь. https://optimuslab.ru/products/akridinovyj-oranzhevyj
Заказ правда от 1000 руб, Но можно что-то еще у них на сайте наковырять, хотя цены ломовые, как и на все медицинское в этом мире.
2/ Родавмин С (B) в воде очень даже хорошо растворяется, 5-15 г/л https://en.wikipedia.org/wiki/Rhodamine_B Сам тоже готовил раствор, могу подтвердить.
3/ По поводу флуорисцеина как раз и интересно разобраться, ибо во всех букварях по люминесцентной микроскопии и проч биохимии он всегда упоминается как первый краситель нашедший широкое применение. Но подробностей ни где не нашел.

4/ флуорохромы разных групп должны бы окрашивать разные структуры, поэтому замечательность акридинового оранжевого отнюдь не исключает применение и других красителей.

PS Наткнулся на такой шедевр автоматического перевода Акридинового Оранжевого на сайте одного из продавцов: https://atl-lab.ru/akridinovyj-apelsin-gidrat-gidrokhlorida-chistyj-soderzhanie-krasitelya-okolo-80

Всем доброго дня.
Вот такой еще вопрос по теме возник.
Как готовить постоянные, да и временные тоже, препараты зоопланктона, так, чтобы его не раздавить.
Для живого, понятное дело, висячая капля идеально подходит, но делать постоянный препарат таким образом не выглядит рациональным.
Просмотрел всю ветку и десяток книжек "по диагонали" пролистал, но что-то про препараты из относительно крупных тварей ни чего не нашел.
Что посоветуете?

Для постоянных препаратов зоопланктона, во первых: взвесь зоопланктона предварительно фиксируете для обездвиживания организмов, далее на центрифуге( великолепно подойдёт и ручная) отделяете сам осадок, который уже нужно фиксировать окончательно (спирт, формалин, т.е. стандартные фиксаторы), далее с помощью центрифуги несколько раз промываете осадок водой для удаления фиксатора, потом осадок окрашиваете и стандартная проводка(для обезвоживания) спиртами, а после спиртов - просветление в ксилоле или в эфирных маслах, и капля этой взвеси наносится на чистое предметное стекло - излишки эфирного масла или ксилола(они текучи) - как бы сами собой стекают( удаляются фильтрованной бумагой), всё это уже окончательно заключается в монтирующую среду.
То есть, основной момент - это работа с центрифугой( для всех этих промываний приходится её использовать двадцать, тридцать раз), без неё никуда.
Вот пожалуйста, диатомея цимбелла из подобного постоянного препарата, приготовленного мною:

Cymbella by vitrioladam vitrioladam, auf Flickr
---------------------------
И да, Вы правы- родамин растворяется в воде, просто у меня - спиртовой раствор, я его использую.

Спасибо за ответ, но он не совсем на мой вопрос.
Речь о копеподах, фораминиферах и проч организмах от 50 микрон и больше, которых если просто сунуть под покровное стекло, то они будут расплющены самым безжалостным образом.
А их фиксация, проводка и окрашивание - отдельная тема, хотя тоже важная.

Да я просто светил 405 нм Зеленой-2 пластины у меня нет, и фильтров к ней.

На каком комплекте вы снимали сувоек?

_________________
МБИ-3, МБИ-11, МБС-1, Микмед-2, Микмед-5, Zeiss Nf/ЛОМО, PZO Biolar PI

Вот сувойки в автолюминесценции с возбуждением УФС-1
DSC01387 by Konstantin M, on Flickr

_________________
МБИ-3, МБИ-11, МБС-1, Микмед-2, Микмед-5, Zeiss Nf/ЛОМО, PZO Biolar PI

Люмам р-8.

Автолюминесценция есть, но она слабая, внутри сувоек светятся также бактерии. Отличная автолюминесценция хлорофилла(красный цвет) у водорослей.

Это просто) Делаем клеевую рамку необходимой высоты вокруг препарата, замкнутую или незамкнутую - по обстоятельствам. По бокам снаружи рамки, кладем два покровных стекла, если макс. высота препарата менее толщины стекла. Или стопкой по два и больше стекла друг на друге. Расстояние между боковыми стеклами, или их стопками, должно быть меньше ширины покровного стекла. Теперь кладем на них основное покр. стекло, слегка поджимем грузиком, и ждем высыхания клея. При установке надо следить чтобы клей не дошел до боковых стекол. После высыхания клея вынимаем боковые подпорки, и получаем "аквариум" с препаратом, который при аккуратном обращении сохраняется очень долго.

Не все понятно.

1) препарата в каком виде? Обезвоженный копепод на стекле? или в капле бальзама? или еще в чем-то?
2) Про какой клей речь идет?
3)Как эту самую необходимую высоту обеспечить? На глазок?

3) внутри аквариум с воздухом? водой? монтирующей средой?

Я поделился только способом изготовления "аквариума" с боле-менее ровным расположением покровного стекла. Всё на глазок) В качестве клея пробовал краску, какой-то клей (приятельница принесла с работы), и даже пробовал из парафина. С парафином приходилось подогревать феном, чтобы стекло осело и прилипло.
Постоянные биологические препараты мне не приходилось делать, экспериментировал с песчинками, засохшими частями насекомых и тд.

Спасибо за совет.
Идея положить покровное стекло на еще пару таких же мне в голову приходила, но не показалась слишком элегантной. С клеем стоит попробовать, может даже желатин подойдет с последующей монтировкой в глицерин-желатин.
Сам пробовал делать рамочку из полиэтилена, в принципе не плохое решение в полевых условиях и на скорую руку, тем более, что полиэтилен есть разной толщины и можно подобрать подходящий, но трудно избежать образование пузырей.

Я про фильтры и пластину.

_________________
МБИ-3, МБИ-11, МБС-1, Микмед-2, Микмед-5, Zeiss Nf/ЛОМО, PZO Biolar PI

Хочу поделиться своим негативным опытом.
Сделал вчера глицерин-желатину по классическому рецепту (15г Желатина в 100мл воды, глицерин до 200мл)
Получился замечательный студень, легко плавился на водяной бане. Но тут я вспомнил, что надо антисептик добавить, дабы все плесенью не поросло в итоге. И поскольку под рукой ни тимола ни фенола не оказалось, решил капнуть пока несколько миллилитров формалина, а фенол позже добавить. Капнул, размешал и оставил остывать.
Через час решил сделать препарат. Нагреваю, а гель не расплавляется! До 100 градусов грею - ноль реакции, холодец течь отказывается, но пока липкий. А на следующее утро даже липнуть перестал.
Тут я вспомнил, что год назад уже был на этих граблях, но благополучно забыл об этом опыте. И вот, как настоящий "бледнолицый брат" второй раз наступил на одни и те-же грабли. На форуме тут тоже кто-то уже писал о такой проблеме.

После непродолжительного поиска в Интернете выяснил, что формалин прекрасно сшивает между собой белковые молекулы. Вот и получилось сшить коллаген, так, что получилось отличное желе, которое не расплавить ни каким образом.

Из моего неудачного опыта можно сделать два вывода.
1) формалин в глицерин-желатин добавлять не следует, если его надо хранить а не не использовать сразу.
2) если добавить немного формалина непосредственно перед монтированием, или поместить в пары формалина готовый препарат после монтирования, то вероятно, можно получить на много более долговечный препарат. Но я пока сам этого еще не пробовал, если кто- попробует - поделитесь опытом.

Vasandr, касательно Вашей глицерин-желатины( а будь она неладна ), то всё Вы сделали неправильно , каарооче - Вам двойка , развод и девичья фамилия.
Ну а если серьёзно, то глицерин-желатина в качестве монтирующей среды, то сама данная среда - ЧРЕЗВЫЧАЙНО КАПРИЗНАЯ(простите за Caps Lock ).
В некоторых случаях применение глицерин-желатины может быть более чем оправданным, но к сожалению, это исключение из правил, редко кому получается правильно приготовить глицерин-желатину( хотя кажется приготовить её- это раз плюнуть), а уж длительно сохранить препарат - куда сложнее. Пример, из моих ранних заметок на данном форуме( внимательно читайте форум, на форуме всё есть ):
-http://www.forum.shvedun.ru/viewtopic.php?f=6&t=188&p=92510&hilit=Mikrokosmos#p92510
Из моего ответа нашему уважаемому Solar-у .
Ссылки на архив Mikrokosmos ( с 1920 по 1989 год)в разделе литература по микроскопии я уже давал, а это уникальная энциклопедия по микроскопии, изучайте немецкий язык, на русском языке ничего подобного Вы никогда не прочитаете.
Естественно, никакой формалин( в качестве консерванта) не пригоден, только фенол, тимол - кристаллизуется, в поляризации Вы увидите фейерверк .
В моей коллекции микропрепаратов есть целый набор довоенных( до 2-ой Мировой Войны) немецких гистологических препаратов, в частности, микропрепарат сальника кошки, окрашенный суданом( окраска всех жиров), и заключённый естественно в глицерин-желатину, по прошествии почти восьмидесяти лет - сохранность, так скажем, не очень, глицерин желатина за это время - скукожилась.
Напротив, препараты, заключённые в классический канадский бальзам - а до сих пор сияют всеми красками( ранее, из моих публикаций на данном форуме):

Спинной мозг, фиксация пиридином, заливка парафином, толщина 10 микрон, окраска!!!: импрегнация серебром( исправлено, спасибо lecter за подсказку , тонирован солями золота) по классическому методу Гольджи-Кахаля( Нобелевская премия за работу по выявлению структуры нервной системы в 1906 году), сам метод впервые был применён ими.

спинной мозг.JPG
Препарату - 80 лет( не меньше)
------------------------------------------------------------------------
Следующий довоенный препарат, сохранность окраски за более, чем 70-80 лет. Препарат всем известный, обыкновенный мазок крови человека, окраска по Гимзе:

мазок крови. Гимза..jpg
Что интересно, препарат костного мозга( срез 5 микрон!!), окрашенный по Гимзе меня не впечатлил, окраска получилась расплывчатая.
----------------------------------
Ну и последние препараты:
Тимус новорожденного ребёнка( фиксация спирт, формол, ледяная уксусная кислота, парафиновый срез -толщина 10 микрон, окраска гематоксилин -эозином):

тимус..jpg
---------------------
А также лёгкое эмбриона( какого не указано, но судя по размеру бронха, скорее всего человека):

лёгкое эмбриона.jpg
-----------------------------------
Всем данным препаратам под восемьдесят лет точно!
------------------------------------------
Ссылка на первоначальную публикацию на форуме:http://www.forum.shvedun.ru/viewtopic.php?f=6&t=166&p=73469&hilit=%D0%BA%D0%B0%D1%85%D0%B0%D0%BB%D1%8E#p73469
------------------------------
То есть, выводы делаете уже сами, нужна ли Вам эта глицерин-желатина, когда с применением классических методов окраски и монтирующих сред - Вы получите, фактически - "вечные препараты".