Астрономия и микроскопия

Форум сайта "Два Стрельца"
Текущее время: 19 мар 2024, 09:52

Часовой пояс: UTC + 3 часа




Начать новую тему Ответить на тему  [ Сообщений: 760 ]  На страницу Пред.  1 ... 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ... 51  След.
Автор Сообщение
СообщениеДобавлено: 13 янв 2014, 16:26 
Не в сети

Зарегистрирован: 09 авг 2013, 20:00
Сообщения: 121
Юрий писал(а):
по поводу спирохет, в окраске они очень прихотливы и окрашиваются краской по Романовскому — Гимзе T.pallidum окрашивается в розовй цвет( отсюда и название бледная трепонема), непатогенные трепонемы — в синий или фиолетовый. pH воды должен быть строго нейтральный, вода желательно бидистиллированая ( а лучше Деионизованная).
По поводу фиксации над пламенен спиртовки, это скорей и портит вам окраску, только химическая фиксация!

Насчет T.pallidum я даже экспериментировать не хочу :shock:
Я пробую с сапрофитными спирохетами ротовой полости. Они анаэробы, поэтому обитают в наиболее укромных местах ротовой полости, где доступ воздуха значительно затруднен: зубодесневые карманы, кариозная полость, под коронками. Из десневых карманов их и беру. Но и то надо делать поправку на то, что возможно они и в препарат даже не попадут. Если получится освоить, то хочу весной попробовать исследовать клещей на спирохеты (боррелии - патогенные и непатогенные).)))

Подскажите еще, пожалуйста, сколько фиксировать в этаноле надо? Я фиксировал 1 минуту, больше боюсь, вдруг посожжет все... :?


Вернуться к началу
 Профиль  
 

СообщениеДобавлено: 13 янв 2014, 16:49 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 11 мар 2009, 11:12
Сообщения: 901
Откуда: Россия, г. Москва
epid писал(а):
Юрий писал(а):
по поводу спирохет, в окраске они очень прихотливы и окрашиваются краской по Романовскому — Гимзе T.pallidum окрашивается в розовй цвет( отсюда и название бледная трепонема), непатогенные трепонемы — в синий или фиолетовый. pH воды должен быть строго нейтральный, вода желательно бидистиллированая ( а лучше Деионизованная).
По поводу фиксации над пламенен спиртовки, это скорей и портит вам окраску, только химическая фиксация!

Насчет T.pallidum я даже экспериментировать не хочу :shock:
Я пробую с сапрофитными спирохетами ротовой полости. Они анаэробы, поэтому обитают в наиболее укромных местах ротовой полости, где доступ воздуха значительно затруднен: зубодесневые карманы, кариозная полость, под коронками. Из десневых карманов их и беру. Но и то надо делать поправку на то, что возможно они и в препарат даже не попадут. Если получится освоить, то хочу весной попробовать исследовать клещей на спирохеты (боррелии - патогенные и непатогенные).)))

Подскажите еще, пожалуйста, сколько фиксировать в этаноле надо? Я фиксировал 1 минуту, больше боюсь, вдруг посожжет все... :?


Фиксация мазка в этаноле 96% как минимум 30-40 мин, в метаноле 10-15.( применение спирта как фиксатора "сжечь" ничего не может).
Любое руководство про микробиологической диагностике.

Болезнь Лайма куда опаснее в субклинических формах и в поздние сроки, чем сифилис первичный и вторичный ,14 дней доксициклина в большинстве( 98%) абсолютно освобождают от T.pallidum.

_________________
мой сайт http://labx.narod.ru/
Polyvar, Zeiss Imager Z1, Jenaval, Микротом Reichert Jung Biocut 2030, К.М.Н. 14.03.02


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 13 янв 2014, 19:04 
Не в сети

Зарегистрирован: 09 авг 2013, 20:00
Сообщения: 121
Согласен. Всё опасно.
Спасибо. По поводу фиксации учту завтра (буду фиксировать 40 мин!). Я-то на опыте окраски по Граму, там спирт для обесцвечивания как промежуточный этап, полминуты передержишь и все, все грамотрицательные (ложно) станут в итоге. Вот и побоялся.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 13 янв 2014, 22:12 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 05 дек 2012, 22:15
Сообщения: 751
Откуда: Одесса
Извините, я вклинюсь на время со своими окрасками срезов :).

Два снимка сердцевин елочных иголок с объективом 20х. Фиксация в ФАА, комбинированная окраска. Краситель №1: основной фуксин 0,02% + сафранин 0,04% + хризоидин 0,04% в 2% уксусной к-те; краситель №2: анилиновый голубой водорастворимый 0,05% в 2% уксусной к-те.


Вложения:
Елочная иголка 23.jpg
Елочная иголка 23.jpg [ 163.09 КБ | Просмотров: 10839 ]
Елочная иголка 24.jpg
Елочная иголка 24.jpg [ 192.06 КБ | Просмотров: 10839 ]
Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 13 янв 2014, 22:34 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 31 дек 2012, 13:23
Сообщения: 1927
Откуда: Волгоград
Сэм-59 писал(а):
Извините, я вклинюсь на время со своими окрасками срезов :).

Два снимка сердцевин елочных иголок с объективом 20х. Фиксация в ФАА, комбинированная окраска. Краситель №1: основной фуксин 0,02% + сафранин 0,04% + хризоидин 0,04% в 2% уксусной к-те; краситель №2: анилиновый голубой водорастворимый 0,05% в 2% уксусной к-те.


На мой взгляд, удачная окраска! А где вы красителей столько набрали ?

_________________
МБИ-3, МБИ-11, МБС-2, МБИ-4, МИН-8, МББ-1А, КФ-1, КФ-4, МФА-2


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 13 янв 2014, 23:20 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 05 дек 2012, 22:15
Сообщения: 751
Откуда: Одесса
Rasalam писал(а):
На мой взгляд, удачная окраска!
Эта окраска очень близка по составу к окраске по Этцольду, о которой писал Актис в ветке viewtopic.php?f=6&t=1584. Только у меня анилиновый голубой водорастворимый (по справочникам как будто то же самое, что и водный синий) при смешивании с остальными красителями тут же выпадает в осадок. Поэтому крашу двумя растворами.
Rasalam писал(а):
А где вы красителей столько набрали ?
У нас на Украине есть возможность частным лицам приобретать реактивы (за исключением наркотических, взрывоопасных, особотоксичных и их прекурсоров, т.е. таких, что используются при изготовлении первых трех) в фирмах, продающих промышленную химию. Красители у них идут в группе "индикаторы". Моя коллекция красителей весьма скромна: эозин, азур-2, сафранин, хризоидин, основной фуксин, анилиновый голубой, кристаллвиолет, толуидиновый голубой и метиленовый синий - брал по 2-5 грамм. Но вот, например, для окраски W3A не смог ничего купить. Но и то, что есть, дает возможность для экспериментов.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 14 янв 2014, 07:52 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 31 дек 2012, 13:23
Сообщения: 1927
Откуда: Волгоград
Сэм-59 писал(а):
У нас на Украине есть возможность частным лицам приобретать реактивы (за исключением наркотических, взрывоопасных, особотоксичных и их прекурсоров, т.е. таких, что используются при изготовлении первых трех) в фирмах, продающих промышленную химию. Красители у них идут в группе "индикаторы". Моя коллекция красителей весьма скромна: эозин, азур-2, сафранин, хризоидин, основной фуксин, анилиновый голубой, кристаллвиолет, толуидиновый голубой и метиленовый синий - брал по 2-5 грамм. Но вот, например, для окраски W3A не смог ничего купить. Но и то, что есть, дает возможность для экспериментов.

В России частным лицам тоже можно приобретать реактивы кроме наркотических, прекурсоров и т.п. Одна проблема - их продают промышленными количествами. К примеру - готовый краситель Романовского минимальная фасовка 1 литр. Или тот же метиленовый синий, фасовка 200 г. Куда мне столько...

_________________
МБИ-3, МБИ-11, МБС-2, МБИ-4, МИН-8, МББ-1А, КФ-1, КФ-4, МФА-2


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 14 янв 2014, 08:21 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 05 дек 2012, 22:15
Сообщения: 751
Откуда: Одесса
Rasalam писал(а):
Одна проблема - их продают промышленными количествами. К примеру - готовый краситель Романовского минимальная фасовка 1 литр. Или тот же метиленовый синий, фасовка 200 г. Куда мне столько...

Наверное, мне повезло с фирмой, где я покупаю :), они взвешивают любое количество.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 14 янв 2014, 08:59 
Не в сети

Зарегистрирован: 28 ноя 2009, 20:24
Сообщения: 1113
Откуда: Омск
Сэм-59 писал(а):
Извините, я вклинюсь на время со своими окрасками срезов :).

Два снимка сердцевин елочных иголок с объективом 20х. Фиксация в ФАА, комбинированная окраска. Краситель №1: основной фуксин 0,02% + сафранин 0,04% + хризоидин 0,04% в 2% уксусной к-те; краситель №2: анилиновый голубой водорастворимый 0,05% в 2% уксусной к-те.


Хорошая работа :)
Попробуйте использовать растворы красителей 0,5% или даже 1% с последующей дифференциацией подкисленным 70% этанолом.

Виталий давно просил написать краткую статью для начинающих по комбинированной окраске тканей растений...Всё не хватает времени сфотографировать процесс...

_________________
Мой блог: http://microcosmos555.blogspot.ru/


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 14 янв 2014, 14:04 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 05 дек 2012, 22:15
Сообщения: 751
Откуда: Одесса
Aktis писал(а):
Хорошая работа
Спасибо!
Aktis писал(а):
Попробуйте использовать растворы красителей 0,5% или даже 1% с последующей дифференциацией подкисленным 70% этанолом.
А какую последовательность операций Вы бы посоветовали с учетом того, что у меня 2 красящих раствора:
а) раствор 1 - дифференцировка - раствор 2 прогрессивное окрашивание
или
б) раствор 1 - ополаскивание - раствор 2 - дифференцировка ?

Я сейчас вторым раствором делаю прогрессивное окрашивание (до кондиции, не больше).
Aktis писал(а):
Виталий давно просил написать краткую статью для начинающих по комбинированной окраске тканей растений...Всё не хватает времени сфотографировать процесс...
Вы ведь уже написали замечательную инструкцию viewtopic.php?f=6&t=1584 , она у меня в закладках :).


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 14 янв 2014, 16:42 
Не в сети

Зарегистрирован: 28 ноя 2009, 20:24
Сообщения: 1113
Откуда: Омск
Сэм-59 писал(а):
А какую последовательность операций Вы бы посоветовали с учетом того, что у меня 2 красящих раствора:
а) раствор 1 - дифференцировка - раствор 2 прогрессивное окрашивание
или
б) раствор 1 - ополаскивание - раствор 2 - дифференцировка ?

Я сейчас вторым раствором делаю прогрессивное окрашивание (до кондиции, не больше).


Попробуйте вот так:
1. Окраска 1% раствором сафранина (10 минут).
2. промывка в воде 2-3 раза.
3. Дифференцировка в подкисленном этаноле (под наблюдением до желаемой окраски).
4. Промывка в воде.
5. Окраска 1% водным раствором анилинового синего (10 минут).
6. промывка водой несколько раз.
7. Окраска в 1% водном растворе хризоидина (5 минут).
8. Промывка в воде несколько раз.
9. Для временного препарата лучше смешать глицерин с водой, качество картинки будет лучше.

Кстати, анилиновый синий (голубой) сложноватый краситель...Плохо растворим, поэтому его надо растворять несколько дней, затем процеживать раствор. Вам надо другой кислотный краситель, который лучше окрашивает клеточные оболочки, а не цитоплазму.


Aktis писал(а):
Виталий давно просил написать краткую статью для начинающих по комбинированной окраске тканей растений...Всё не хватает времени сфотографировать процесс...
Вы ведь уже написали замечательную инструкцию viewtopic.php?f=6&t=1584 , она у меня в закладках :).[/quote]

Эта методика сложновата для начинающих...Я имел ввиду проилюстрировать другую методику, с более доступными красителями и ручной резкой и т.п. То есть, чтобы методикой могли воспользоваться многие желающие

_________________
Мой блог: http://microcosmos555.blogspot.ru/


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 14 янв 2014, 17:38 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 05 дек 2012, 22:15
Сообщения: 751
Откуда: Одесса
Aktis писал(а):
Попробуйте вот так...
Спасибо, Анатолий Иванович, обязательно попробую, вот только закончу один эксперимент со старыми составами...
Aktis писал(а):
Кстати, анилиновый синий (голубой) сложноватый краситель...Плохо растворим, поэтому его надо растворять несколько дней, затем процеживать раствор. Вам надо другой кислотный краситель, который лучше окрашивает клеточные оболочки, а не цитоплазму.

Что удалось достать, тем и пользуюсь. Ни алциановых зеленого и синего, ни астра синего, ни светлого зеленого не добыл. Кстати, у меня не было особых проблем с растворением анилинового голубого в воде - навесил на 1% р-ор, залил дист. водой, через пару часов профильтровал - практически все растворилось. Наверное, не зря в названии моего красителя есть приписка "водорастворимый".
Aktis писал(а):
.Я имел ввиду ...другую методику, с более доступными красителями и ручной резкой и т.п. То есть, чтобы методикой могли воспользоваться многие желающие

Это было бы здорово.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 15 янв 2014, 18:27 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 21 фев 2013, 21:43
Сообщения: 466
Откуда: Украина
Rasalam писал(а):
Сэм-59 писал(а):
У нас на Украине есть возможность частным лицам приобретать реактивы (за исключением наркотических, взрывоопасных, особотоксичных и их прекурсоров, т.е. таких, что используются при изготовлении первых трех) в фирмах, продающих промышленную химию. Красители у них идут в группе "индикаторы". Моя коллекция красителей весьма скромна: эозин, азур-2, сафранин, хризоидин, основной фуксин, анилиновый голубой, кристаллвиолет, толуидиновый голубой и метиленовый синий - брал по 2-5 грамм. Но вот, например, для окраски W3A не смог ничего купить. Но и то, что есть, дает возможность для экспериментов.

В России частным лицам тоже можно приобретать реактивы кроме наркотических, прекурсоров и т.п. Одна проблема - их продают промышленными количествами. К примеру - готовый краситель Романовского минимальная фасовка 1 литр. Или тот же метиленовый синий, фасовка 200 г. Куда мне столько...


Rasalam, думаю что есть фирмы которые готовы взвесить и по граммам, даже если у них в прайсах минимальная фасовка 200 г. К томуже ну хотя бы тот же метиленовый синий - относительно дешевый краситель. Помню еле отмыл стол когда пересыпал.
На счет небольшого количества романовского - можно попросить в любой лаборатории в поликлинике, смотря как попросите. но вы же помните что окрашивание по романовскому требует вытяжного шкафа.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 15 янв 2014, 23:32 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 05 дек 2012, 22:15
Сообщения: 751
Откуда: Одесса
Тот самый опыт, который хотел завершить.

Продольный срез елочной иголки (вышел тангентальный, а не радиальный), фиксация в ФАА, разрезан на 2 части.

Первая часть окрашена по уже описанной схеме: краситель №1: основной фуксин 0,02% + сафранин 0,04% + хризоидин 0,04% в 2% уксусной к-те; промывка, краситель №2: анилиновый голубой водорастворимый 0,05% в 2% уксусной к-те, промывка, проводка через глицерин. Фото 1.

Вторая часть окрашена по схеме: краситель №3: основной фуксин 0,02% + азур 0,02% + хризоидин 0,04% в 2% уксусной к-те; промывка, краситель №4: эозин 0,1% в нейтральной воде, промывка, проводка через глицерин. Фото 2.

В первой окраске лучше выделяются клеточные оболочки, во второй - некоторые клетки почему-то полностью закрашиваются азуром.

На фото 3 - радиальный срез во второй окраске. Все фото с объективом 20х.

Кажется, толковый продольный срез без заливки в парафин не получится - иголка в обжимке не держится.


Вложения:
Комментарий к файлу: Фото 1.
Елочная иголка 27.jpg
Елочная иголка 27.jpg [ 171.21 КБ | Просмотров: 10757 ]
Комментарий к файлу: Фото 2.
Елочная иголка 28.jpg
Елочная иголка 28.jpg [ 208.4 КБ | Просмотров: 10757 ]
Комментарий к файлу: Фото 3.
Елочная иголка 25.jpg
Елочная иголка 25.jpg [ 234.64 КБ | Просмотров: 10757 ]
Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 16 янв 2014, 11:38 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 05 дек 2012, 22:15
Сообщения: 751
Откуда: Одесса
Aktis писал(а):
Попробуйте вот так:
1. Окраска 1% раствором сафранина (10 минут).
2. промывка в воде 2-3 раза.
3. Дифференцировка в подкисленном этаноле (под наблюдением до желаемой окраски).
4. Промывка в воде.
5. Окраска 1% водным раствором анилинового синего (10 минут).
6. промывка водой несколько раз.
7. Окраска в 1% водном растворе хризоидина (5 минут).
8. Промывка в воде несколько раз.
9. Для временного препарата лучше смешать глицерин с водой, качество картинки будет лучше.

Мой анилиновый голубой 1% дает сильный перекрас, излишек водой не отмывается, только спирте, и то не полностью и после отхода остатков сафранина...
Поэтому на второй попытке использовал 0,25% р-ор анилинового синего.
Вот ход процесса:
Фото 1. Нефиксированный свежий тангентальный срез.
Фото 2. Фиксированный срез после окраски в сафранине.
Фото 3. После дифференцировки в подкисленном 30% спирте (это чтобы не сильно быстро вымывался краситель).
Фото 4. После окраски в анилиновом синем.
Фото 5. после окраски в хризоидине.
Мне кажется, что красить анилиновым синим лучше в финальной стадии. К тому же у Барыкиной нашел об этом красителе: "Дифференцируется с трудом, поэтому окрашивание ведут прогрессивным способом".


Вложения:
Комментарий к файлу: Фото 1.
Елочная иголка 17.jpg
Елочная иголка 17.jpg [ 230.84 КБ | Просмотров: 10738 ]
Комментарий к файлу: Фото 2.
Елочная иголка 29.jpg
Елочная иголка 29.jpg [ 195.98 КБ | Просмотров: 10738 ]
Комментарий к файлу: Фото 3.
Елочная иголка 30.jpg
Елочная иголка 30.jpg [ 199.1 КБ | Просмотров: 10738 ]
Комментарий к файлу: Фото 4.
Елочная иголка 31.jpg
Елочная иголка 31.jpg [ 192.44 КБ | Просмотров: 10738 ]
Комментарий к файлу: Фото 5.
Елочная иголка 32.jpg
Елочная иголка 32.jpg [ 199.51 КБ | Просмотров: 10738 ]
Вернуться к началу
 Профиль  
 
Показать сообщения за:  Поле сортировки  
Начать новую тему Ответить на тему  [ Сообщений: 760 ]  На страницу Пред.  1 ... 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ... 51  След.

Часовой пояс: UTC + 3 часа


Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: Google [Bot] и гости: 29


Вы не можете начинать темы
Вы не можете отвечать на сообщения
Вы не можете редактировать свои сообщения
Вы не можете удалять свои сообщения
Вы не можете добавлять вложения

Найти:
Перейти:  
Создано на основе phpBB® Forum Software © phpBB Group
Русская поддержка phpBB
Яндекс.Метрика