Alex писал(а):
Подскажите пожалуйста, какими подручными люминесцентными веществами можно окрашивать препарат?
вы бы написали, что хотите наблюдать?
единственное что приходит на ум из доступного:
наибольшее распространение в качестве люминесцентной метки кальция в последнее время получил антибиотик тетрациклин. Способность тетрациклина образовывать с
кальцием хеллат[304] была использована для разработки методов исследования кальция не только в минерализованных тканях[305, 306], но и в различных клетках[307] и их органоидах[308-311].
304. Regna P.В., Solomons I. A., Murai К., Timureck E., Brunnings K.J., Lazier N.A. The isolation and
general properties of terramycin and terramcin-sults.– J. Amer. Chem. Soc., 1951, v. 73, 4211.
305. Milch R.А., ТоbiеJ.E., Robinson R.A. A microscopic study of tetracycline localization in sceletal
neoplasms.– J. Histochem. and Cytochem., 1961, v. 9, 261.
306. Frost H.M., Villanueva S.R., Roth H. Tetracycline staining of newly forming bone and mineralizing
cartilage in vivo.– Stain Technol., 1960, v. 35, 135.
307. Tapp E., Kovacs К., Carrol R. Tetracyclin staining of tissues in vitro.–Stain Technol., 1966, 40, 199.
308. Du Buy H.G., Showacre J.L. Selective localization of tetracycline in mitochondria of living cells.–
Science, 1961, v. 133, 196.
309. Caswell А.H., Hutchison J.D. Visualization of membrane bound cations by a fluorescent technique.–
Biochem. and Biophys. Res. Communs, 1971, v. 42, №1, 43-49.
310. Caswell A.H. The migration of divalent cation in mitochondria visualized by a fluorescent chelate
probe.– J. Membr. Biol., 1972, v. 7, №4, 345–346.
311. Popov P.G., Vartzarova К.J., Kossekova G.P., Nikolov T.K. Fluorimetric study of tetracyclines – a new
class of fluorescent probes.– Biochem. Pharmacol., 1972, v. 21, №17, 2363–2372.
Животным вводили сначала ализариновый красныйS, через неделю- окситетрациклинb еще через неделю- флуорексон.
По прошествий недели после введения флуорексона изготавливали препараты костей и их люминесценцию исследовали микроскопически.
В результате такой обработки вокруг гаверсовых полостей кости образовывались концентрические зоны разного цвета люминесценции. Наиболее удаленная от гаверсова канала область обладала красной люминесценцией ализарина, далее следовала область золотисто-желтой люминесценции окситетрациклина и непосредственно к гаверсовой полости примыкало кольцо зелёной люминесценции флуорексона. Эта работа представляет собой пример изящного применения трехцветного люминесцентного метода, позволяющего легко проследить направление и скорость минерализации кости.
Одним из важнейших и наиболее трудных вопросов, возникающих при попытке использовать люминесцентные, красители-метки для изучения функциональных механизмов клетки является вопрос о природе субстрата, связывающего люминесцентную метку. Большая сложность и многокомпонентность клетки, наличие в ней взаимодействующих структурных органоидов, имеющих зачастую сходные механизмы действия, не позволяют использовать непосредственно представления о взаимодействии метки с какими-либо чистыми веществамиin vitro для интерпретации данных, полученных при исследовании клетки.